ответ tgg от 20.5.2010, 10:44 Цитата Варлок от шварца
1. В программе Blast выбрано максимальное совпадение. Пожалуйста, смотрите на здоровье, что и куда прилипнет. Бремя доказывания, что при ПЦР Вы амплифицируете последовательности, не относящиеся к человеческому геному, лежит именно на Вас!
2. Легко могу себе представить, как секвенируют геном ДНК-содержащих вирусов – а именно по естественной вирусной ДНК, а вот с РНК-содержащими картина более чем странная. Вы не видели ген gag воочию. Вы его сделали искусственно из РНК и, следовательно, не можете утверждать наверняка, что в естественном гене вируса (как и во всей ДНК, полученной с РНК) не содержатся интроны или еще какие-нибудь некодирующие участки. У Вас есть два пути доказать свою правоту – либо сделать из полученной в пробирке ДНК полнофункциональный РНК-вирус, не отличающийся от естественного, либо встроить в геном лимфоцитов Вашу якобы вирусную ДНК со всеми вытекающими. Насколько мне известно, клепать вирусы генные инженеры пока что не умеют.)))))))))))) Кроме того, из статьи Protocol for Nearly Full-Length Sequencing of HIV-1 RNA from Plasma (Протокол секвенирования почти всей РНК ВИЧ-1 из плазмы) приводится описание процедуры, в том числе: The incubation temperature for cDNA synthesis was 50°C, which was recommended by the manufacturer (Температура инкубации для синтеза кДНК составляла 50 градусов, как рекомендовано производителем). При этом 50 градусов – это самая низкая температура, упоминаемая в статье. Там встречаются и 65, и даже 85 градусов! Позвольте, какое отношение эти манипуляции in vitro имеют к процессам in vivo? У человека 50 градусов с жизнью просто несовместимы!!! Интересно, а Ваша обратная транскриптаза при 36,6 градусов Цельсия… ну, хорошо, пусть будет при 40…. вообще работает?
no subject
ответ tgg
от 20.5.2010, 10:44
Цитата
Варлок от шварца
1. В программе Blast выбрано максимальное совпадение. Пожалуйста, смотрите на здоровье, что и куда прилипнет. Бремя доказывания, что при ПЦР Вы амплифицируете последовательности, не относящиеся к человеческому геному, лежит именно на Вас!
2. Легко могу себе представить, как секвенируют геном ДНК-содержащих вирусов – а именно по естественной вирусной ДНК, а вот с РНК-содержащими картина более чем странная. Вы не видели ген gag воочию. Вы его сделали искусственно из РНК и, следовательно, не можете утверждать наверняка, что в естественном гене вируса (как и во всей ДНК, полученной с РНК) не содержатся интроны или еще какие-нибудь некодирующие участки. У Вас есть два пути доказать свою правоту – либо сделать из полученной в пробирке ДНК полнофункциональный РНК-вирус, не отличающийся от естественного, либо встроить в геном лимфоцитов Вашу якобы вирусную ДНК со всеми вытекающими.
Насколько мне известно, клепать вирусы генные инженеры пока что не умеют.))))))))))))
Кроме того, из статьи Protocol for Nearly Full-Length Sequencing of HIV-1 RNA from Plasma (Протокол секвенирования почти всей РНК ВИЧ-1 из плазмы) приводится описание процедуры, в том числе:
The incubation temperature for cDNA synthesis was 50°C, which was recommended by the manufacturer (Температура инкубации для синтеза кДНК составляла 50 градусов, как рекомендовано производителем). При этом 50 градусов – это самая низкая температура, упоминаемая в статье. Там встречаются и 65, и даже 85 градусов! Позвольте, какое отношение эти манипуляции in vitro имеют к процессам in vivo? У человека 50 градусов с жизнью просто несовместимы!!! Интересно, а Ваша обратная транскриптаза при 36,6 градусов Цельсия… ну, хорошо, пусть будет при 40…. вообще работает?